附录 A 实验室试剂和材料

设备

一个储备充足的实验室会有计时器、微量移液器、永久记号笔和冰桶（还有冰！）等东西。 BioBuilder 实验室还假设有一些消耗材料可用。如果从 Ward’s Science 购买试剂盒，则会提供这些耗材，但许多实验室都有以下耗材：

丁腈或乳胶手套
15 ml 和/或 50 ml 锥形螺旋盖管
微量离心管（1.5–2 ml）和架子
无菌试管和试管架
无菌牙签、接种环和/或涂抹棒
10 厘米聚苯乙烯培养皿 - 如果您自己倒盘子

所述每个实验室都需要以下特定实验室设备。

	滚轮或摇床	搅拌板和 125 ml 锥形瓶	分光光度计和比色皿/玻璃管*	培养箱 **（30°C 或 37°C）	水浴（42°C）
ETS	x	x	x
iT	x		x
CW				x	x
GB				x	x

*可以替代浊度标准品。
**也可以在室温下孵育，但需要更长的孵育时间。

试剂制备和储存

除非另有说明，您可以从主要化学品供应商处购买试剂，例如 Sigma-Aldrich 和 VWR。也可以通过 Gold Biotechnology 和 Ward’s Science 等专业供应商以较低的价格购买它们。

固体和液体介质

您还可以通过 Teknova 等供应商购买介质。

Luria Broth (LB) 液体培养基

将 10 g 胰蛋白胨、5 g 酵母提取物和 10 g 氯化钠溶解在水中，制成 1 L LB 培养基。高压灭菌或使用 0.2 μM 过滤器过滤灭菌。

Luria Broth (LB) 琼脂平板

将 10 g 胰蛋白胨、5 g 酵母提取物、10 g NaCl 和 7.5 g 琼脂添加到水中，制成 500 ml LB 琼脂培养基（足够约 25 个平板）。高压灭菌器溶解和灭菌。每个无菌培养皿中倒入约 20 ml LB 琼脂。冷却直至凝固，然后将介质面朝上存放在冰箱中长达几个月。要制作 LB 琼脂 + 氨苄青霉素平板，首先等待培养基冷却到足以触摸 (~55°C)，然后添加 500 µl 1000x 氨苄青霉素原液并旋转混合，然后按照上述方法倒入培养皿中。 1个月内使用。

不含色氨酸 (-Trp) 的合成完全 (SC) 琼脂平板

将 3.4 g 不含氨基酸的酵母氮基、1 g 合成完全氨基酸脱落混合物 (-Trp)、10 g 葡萄糖和 10 个琼脂添加到水中，制成 500 ml LB 琼脂培养基。高压灭菌器溶解和灭菌。每个无菌培养皿中倒入约 20 ml SC-Trp 琼脂。冷却直至凝固，然后将介质面朝上存放在冰箱中长达几个月。

酵母提取物蛋白胨葡萄糖 (YPD) 琼脂平板

将 10 g 蛋白胨、5 g 酵母提取物、10 g 葡萄糖和 10 g 琼脂加入水中，制成 500 ml YPD 琼脂培养基。高压灭菌器溶解和灭菌。每个无菌培养皿中倒入约 20 ml YPD 琼脂。冷却直至凝固，然后将介质面朝上存放在冰箱中长达几个月。

库存解决方案

氨比西林（100 毫克/毫升溶液）

将 100 mg 氨苄青霉素溶解在 1 ml 无菌水中制成 1000x 储备液，或使用 0.2 uM 过滤器对溶液进行过滤灭菌。每 1 L LB 或 LB+琼脂中添加 1 ml 储备液，最终工作浓度为 100 ug/ml。冷冻原料可保存长达六个月或在冰箱中保存一周。

香蕉提取物（例如，在 amazon.com 上出售的 Frontier Banana Flavor）

按照 Eau That Smell 实验室协议中的描述制定香蕉气味标准。标准品可在冰箱中保存长达数周。

氯化钙，CaCl_2 （0.1 M 溶液）

将 735 mg CaCl_2 *2H 2 0 溶解于 50 ml 无菌水中或使用 0.2 μM 过滤器过滤灭菌溶液，制成 0.1 M 细菌转化溶液。在室温下储存溶液。

异戊醇

将 700 μl 添加到 1 L LB 培养基中。将 LB+异戊醇在冰箱中保存最多几天。

异丙基 β-D-1-硫代半乳糖苷，IPTG（0.1M 溶液）

将 24 mg IPTG 溶解在 1 ml 无菌水中，制成 100 倍原液，或使用 0.2 μM 过滤器对溶液进行过滤灭菌。每 25 ml LB 中添加 250 μl 储备液，使最终工作浓度为 1 mM。冷冻原料可保存长达 6 个月或在冰箱中保存一周。

邻硝基苯基-β-半乳糖苷，ONPG（0.01% 溶液）

将 40 mg ONPG 溶解在 40 ml 水中，制成 0.01% 的溶液。冷冻保存长达几个月或在冰箱中保存一周。

缓冲区

碳酸氢盐缓冲液（2% 溶液）

将 1 g 碳酸氢钠或 1 g Arm & Hammer 小苏打溶解在 50 ml 水中，制成 2% 的碳酸氢盐溶液。

碳酸盐缓冲液（1M 溶液）

将 5.3 克碳酸钠或 5.3 克纯碱（例如，在 amazon.com 上出售的 Tulip Fashion Art 纯碱）溶解在 50 ml 水中，制成 1M 碳酸盐溶液。

裂解缓冲液（1% SDS 溶液或稀洗洁精）

将 0.5 克 SDS（十二烷基硫酸钠）或 1 滴“喷射”透明液体洗洁精溶解在 50 毫升水中。

＃＃＃各种各样的

氯化钡，BaCl_2 （1% 溶液）

将 20 mg BaCl_2 溶解在 2 ml 水中，制成 1% BaCl_2 溶液。每套完整的浊度标准品大约需要 1.75 ml 1 % BaCl_2 。

漂白剂（10% 溶液）

将 10 毫升漂白剂（次氯酸钠）添加到 100 毫升水中，制成 10% 的漂白剂溶液。

电子构建实验所需试剂

请参阅 Mouser Electronics 网站上的 BioBuilder 项目页面

硫酸（1% 溶液）

将 1 ml 浓 H_2 SO_4 添加到 99 ml 水中，制成 1 % H_2 SO_4 溶液。每套完整的浊度标准品大约需要 80 ml 1 % H_2 SO_4 。安全注意事项：使用浓缩 H_2 SO_4 时要格外小心。应在防护罩中小心操作并使用个人防护装备（例如手套、实验室外套和安全眼镜），避免接触皮肤和/或吸入烟雾。

酵母转化试剂盒

MP Biomedicals 出品的 EZ-Yeast™ 转化试剂盒 #112100200

或者

Frozen-EZ 酵母转化 II 试剂盒（Zymo Research 出品）#T2001

实验室试剂和材料